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輔助方案：膠原酶消化制備脾臟細(xì)胞懸液實(shí)驗(yàn)材料：1.4000U/ml膠原酶D，融化后置于冰上2.HBSS，已滅菌，含Ca+、Mg2+（購(gòu)置于LifeTechnologies）3.小鼠脾臟4.皮下注射針，22G×11/2in內(nèi)徑（BectonDickinson）5.10ml、5ml一次性注射器（如BectonDickinson）6.100mm直徑培養(yǎng)皿（如Falcon）7.2個(gè)高壓滅菌鍋的鋸齒狀解剖鑷（如Roboz）8.高壓滅菌的不銹鋼網(wǎng)：將40目的不銹鋼網(wǎng)剪成5cm×5cm的小...

腫瘤是細(xì)胞在各種致瘤因素的作用下，基因發(fā)生改變，失去對(duì)其生長(zhǎng)的正常調(diào)控，導(dǎo)致細(xì)胞異常增生。惡性腫瘤又稱為癌癥（cancer），是目前危害人類健康z(mì)ui嚴(yán)重的一類疾病。我國(guó)城市地區(qū)居民死因*位為惡性腫瘤。腫瘤細(xì)胞在很多生物學(xué)特性上不同于正常細(xì)胞，也有別于修復(fù)性增生的細(xì)胞，具有明顯的去分化現(xiàn)象。一、腫瘤細(xì)胞的分化特征惡性腫瘤細(xì)胞的特征之一是分化程度低，表現(xiàn)為形態(tài)上的幼稚性，功能上的異常，細(xì)胞的多種表型（phenotype）又回到原始的胚胎細(xì)胞表型，即發(fā)生細(xì)胞的去分化現(xiàn)象。機(jī)體在致...

生物、藥物等許多的研究均需要通過觀察細(xì)胞體積的變化或細(xì)胞數(shù)目增減的來(lái)判斷和評(píng)估實(shí)驗(yàn)的效果。由于細(xì)胞所處環(huán)境的改變可促使其自身體積做出相應(yīng)的變化，以便適應(yīng)改變后的環(huán)境大致新的平衡。由于并不能清晰地知道該種細(xì)胞體積變化規(guī)律，因此必須檢測(cè)其體積或細(xì)胞數(shù)目隨條件、時(shí)間的變化。細(xì)胞的發(fā)育與細(xì)胞分裂周期級(jí)數(shù)遞增均需要連續(xù)不斷的細(xì)胞增殖。在培養(yǎng)液中正在增殖的細(xì)胞在其分裂前其體積將增大至原體積的兩倍。然而對(duì)細(xì)胞發(fā)育與分裂的速度作如何調(diào)整才能保證細(xì)胞體積的不變并不明確。因此，測(cè)量細(xì)胞的體積的變...

二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學(xué)意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個(gè)體和生存中起著非常重要的作用。它是細(xì)胞在一定生理?xiàng)l件下一系列順序發(fā)生事件的組合，是細(xì)胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過程。細(xì)胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征。在形態(tài)上可見凋亡細(xì)胞與周圍細(xì)胞脫離接觸，細(xì)胞變園，細(xì)胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、細(xì)胞核固縮破裂呈團(tuán)塊狀或新月狀分布、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞膜進(jìn)一步融合將細(xì)胞分成多個(gè)完整包裹的凋亡小體，凋亡小體zui后被吞噬...

（一）原理混合單個(gè)核細(xì)胞懸液在通過尼龍毛柱時(shí)，B細(xì)胞、漿細(xì)胞、單核細(xì)胞和一些輔助細(xì)胞被選擇性粘附于尼龍毛上，而多數(shù)T細(xì)胞則通過尼龍毛柱，這是獲得富含T細(xì)胞群的有效方法。（二）材料及試劑1．尼龍毛（FemwallLaboratories,LP－1LeukoqakleukocyteFilters）。2．燒杯、鋁箔、漏斗、一次性手套等。3．裝填尼龍毛柱，一次性注射器。4．取自然沉降的上層血漿，過聚蔗糖—泛影葡胺分層液后，獲取的血漿和分層液之間的單個(gè)核細(xì)胞層。（三）操作方法1．尼龍毛...

一、形態(tài)學(xué)觀察方法1、HE染色、光鏡觀察：凋亡細(xì)胞呈圓形，胞核深染，胞質(zhì)濃縮，染色質(zhì)成團(tuán)塊狀，細(xì)胞表面有“出芽”現(xiàn)象。2、丫啶橙（AO）染色，熒光顯微鏡觀察：活細(xì)胞核呈黃綠色熒光，胞質(zhì)呈紅色熒光。凋亡細(xì)胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側(cè)，可見細(xì)胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。3、臺(tái)盼藍(lán)染色：如果細(xì)胞膜不完整、破裂，臺(tái)盼藍(lán)染料進(jìn)入細(xì)胞，細(xì)胞變藍(lán)，即為壞死。如果細(xì)胞膜完整，細(xì)胞不為臺(tái)盼藍(lán)染色，則為正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞。此方法對(duì)反映細(xì)胞膜的完整性，區(qū)別壞死細(xì)胞有一定的幫助。4、透射電鏡觀察：...